Венерология

Диагностика ВИЧ

На начало XXI века медицина имеет полное право утверждать, что ВИЧ можно контролировать и даже лечить.

Главное - выявить инфекцию до того, как она нанесет непоправимый ущерб здоровью, и начать ее лечение.

диагностика ВИЧ

Протекание болезни

Для заражения человека необходимо, чтоб возбудитель попал в кровь.

Напомним пути инфицирования:

  • Половой (незащищенный секс)
  • Парентеральный (общий шприц, нестерильные инструменты косметолога и так далее)
  • Вертикальный или перинатальный путь заражения (от мамы к ребенку)

 

передача ВИЧ от матери к ребенку

Попав в кровь, вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) проникает в лимфоциты и другие клетки организма, встраивает свою РНК в их ядро.

После этого зараженная клетка начинает продуцировать новые вирионы, начинается инфекционный процесс.

При этом человек становится заразным спустя несколько недель после инфицирования.

Для ВИЧ характерен очень длительный бессимптомный период.

Клинические проявления возникают тогда, когда гибнет очень много пораженных лимфоцитов.

И человек остается беззащитен перед другими инфекциями.

Это - СПИД - синдром приобретенного иммунодефицита, заключительная стадия ВИЧ-инфекции.

Сопровождается у больных поражением легких, слизистых оболочек, кишечника, центральной нервной системы.

Чем и где обследоваться

Обнаружить ВИЧ можно только по анализу крови.

Правда, сейчас есть тесты на выявление антигенов вируса в моче, однако точность их еще не безупречна.

Для современной медицины важно, чтоб методы диагностики соответствовали ряду важных критериев:

  • Высокая точность
  • Оптимальная стоимость
  • Доступность для массовых исследований (скрининга)
  • Возможность использования и у детей, и у взрослых

 

После многих лет поиска был выработан оптимальный принцип: применение разных методик на разных этапах диагностики ВИЧ.

Соберем в таблице характеристики и основные особенности наиболее актуальных методик диагностики:

Название метода

Диагностический принцип

Стоимость

Чувствительность

Специфичность

Экспресс-тест

Выявление антител к ВИЧ

Низкая

98%

99%

ИФА (иммуноферментный анализ)

Выявление антител к ВИЧ и антигенов вируса

Средняя

95%

99%

Иммуноблот

Антитела к нескольким белкам ВИЧ

Высокая

99%

100%

ПЦР (полимеразно цепная реакция)

Генетический материал вируса

Высокая

99%

98%

При этом важно понимать, что неправильное использование тестов или несовершенное оборудование сильно снижают точность анализов.

Сначала идет скрининг - постановка быстрых тестов, основанных на методе иммунохроматографии.

В случае положительного результата, еще один анализ крови проверяется другой тест-системой.

Если вторая проба отрицательная, ставится третий анализ с третьей тест-системой.

Положительный третий результат - показание к дообследованию методом ИФА или иммуноблоттингом.

В ряде случаев для окончательной верификации диагноза применяют молекулярно-генетические методики.

По такому алгоритму предлагается выявлять инфицированных среди категории социально дезадаптированных лиц.

Так как для проведения быстрого теста требуется не более 30 минут.

Хотя правильнее все же обратиться в ближайший кожновенерологический диспансер и там пройти полное и максимально точное обследование.

сдача крови на ВИЧ

К такой рекомендации стоит прислушиваться.

Потому что достаточно часто люди одновременно с ВИЧ заражаются хроническими вирусными гепатитами и другими инфекциями, передающимися половым путем.

Из-за этого результаты быстрых тестов могут искажаться.

Например, заметные сложности представляет сифилис.

Трепонемная инфекция иногда приводит к ложноположительным срабатываниям иммуноферментных методов.

Лабораторная диагностика

Целью медиков является как можно более раннее выявление факта заражения.

К сожалению, возможностей обычной клинической лаборатории для этого недостаточно.

Так как требуется высокоточное и дорогостоящее оборудование, специально обученный персонал.

Такие лаборатории называются клинико-иммунологическими и оборудуются при крупных диагностических центрах или областных клинических больницах.

Алгоритм диагностики ВИЧ определяется тем, насколько полно оснащена лаборатория.

Без иммуноблота

Сначала идет проведение стандартного анализа ИФА.

При отрицательном результате человек считается здоровым.

Но если недавно был риск заражения, например - интим с ВИЧ-инфицированным человеком, обследование необходимо повторить через 4-6 месяцев.

Положительный ответ считается предварительным, и кровь берется еще раз.

Повторное исследование проводится на тест-системе другого производителя.

анализы на ВИЧ в лаборатории

С иммуноблотом

Все так же, как и в разделе выше.

Но при положительном результате первой ИФА, второй образец крови направляется на иммуноблот.

Этот анализ является основным и подтверждает или исключает факт заражения.

Молекулярно-генетические тесты

На этапе диагностики их применяют достаточно редко, для уточнения наиболее спорных моментов.

Например - когда необходимо срочно установить, здоров человек или заражен.

Или когда клинические проявления свидетельствуют за ВИЧ/СПИД, а другие методики не дают ответа со 100% точностью.

Клиника

Распознать заражение по симптомам может только очень опытный врач.

И только тогда, когда заканчивается период бессимптомного носительства.

Даже несмотря на то, что на текущий момент, этиология, патогенез и эпидемиология инфекции достаточно хорошо изучены.

Инкубационный период составляет несколько дней или недель.

Затем следует фаза первичных проявлений.

Протекает она под маской ОРЗ (лихорадка, насморк, кашель) и поэтому остается не распознанной.

Длится несколько дней.

Любые лабораторные тесты в этом периоде также будут отрицательны.

Затем следует фаза вирусемии.

Она является чем-то похожей на сепсис.

Вирионы с током крови распространяются по всему организму и заражают все клетки, которые обладают особыми рецепторами (CD 4).

вирус ВИЧ в крови

Проникнув внутрь клетки, генетический материал ВИЧ встраивается в ее ядро и заставляет начать производство новых вирусных частиц.

Клетка при этом погибает не сразу.

Отсюда и берется такой длительный бессимптомный период, достигающий нескольких лет или даже десятилетий.

Все современные тесты могут обнаружить факт заражения только спустя 2 или 3 месяца после инфицирования.

Когда в крови накопится достаточное для анализа количество антител IgG.

Исключение - ПЦР, которая нацелена на идентификацию генома возбудителей.

Дальше, с началом стадии СПИД, человек начинает болеть разными инфекциями:

  • Кандидоз
  • Криптококкоз
  • Пневмоциста
  • Массивные герпетические атаки (опоясывающий лишай)
  • Токсоплазмоз
  • Туберкулез

 

У человека со здоровым иммунитетом такие заболевания очень большая редкость.

Поэтому их еще называют маркерами ВИЧ-инфекции.

Как правило, эти процессы и становятся причиной гибели больного СПИДом человека.

Поэтому диагностика и выявление факта заражения ВИЧ служит самым действенным методом профилактики СПИДа, так как больной может начать получать лечение.

Также, что немаловажно, от заражения уберегаются близкие люди, члены семьи и половые партнеры.

Методы диагностики

В верхней части статьи мы упоминали несколько методик, которыми пользуются вирусологические лаборатории для диагностики ВИЧ-инфекции.

Пришла пора познакомиться с ними поближе.

Иммуноферментный анализ

Сокращенно - ИФА.

Ранние варианты исследования допускали выявление только антител к ВИЧ.

Однако на современном этапе есть возможность обнаруживать этим методом один из специфических антигенов вируса (белок p24).

Основой для постановки классической реакции являются иммобилизованные (фиксированные к субстрату) на специальных пластиковых планшетах антигены ВИЧ.

Как правило, это - многолуночные пластинки из инертного пластика, позволяющие проводить исследование сразу нескольких десятков образцов крови.

диагностика на ВИЧ методом ИФА

Этапы:

  • Вскрытие планшета в стерильных условиях
  • Нанесение в лунки по нескольку капель сыворотки крови из исследуемых проб
  • Добавление проявляющих антител (синтезируются промышленным способом, входят в комплект тест-системы)
  • Оценка результатов и установка диагноза

 

Теперь опишем суть.

На дне лунок находятся антигены вируса, которые синтезированы и зафиксированы там изготовителем системы.

Когда добавляют сыворотку в лунки, антитела IgG к ВИЧ (если они есть) связываются с этими антигенами и тоже фиксируются к субстрату.

Проявляющая сыворотка содержит в себе антитела к IgG.

Эти белки связаны со специальным ферментом с молекулой красителя.

Если в лунке содержатся IgG, то проявляющие антитела освобождаются от фермента и там появляется окраска. Факт реакции подтверждается спектрофотометром, образец считается таким, что содержит в себе антитела.

Чувствительность метода колеблется между 93-100%.

Специфичность достигает 99%, однако нельзя исключить ложных срабатываний на IgG к другим возбудителям.

Поэтому верификация диагноза требует повторного проведения ИФА на другой тест системе или использования другого диагностического метода.

Иммуноблот

Другие названия - иммуноблоттинг, вестерн-блот, и в его основе тоже лежит метод ИФА.

Суть такова:

  • Промышленным путем создаются пластинки из нитроцеллюлозы, на которые электрофорезом в разных местах нанесены 5 разных белков возбудителя СПИДа.
  • На эти пластинки наносится исследуемая сыворотка.
  • Если человек заражен, то антитела прикрепятся в нескольких метах пластинки.
  • Визуализация результатов осуществляется добавлением проявляющих антител, как при ИФА.

 

Для того чтоб результат иммуноблоттинга считался положительным, должны появиться окрашенные полоски минимум в трех местах пластинки.

иммуноблоттинг на ВИЧ

То есть должны быть выявлены антитела не менее чем к трем белкам ВИЧ.

В противном случае результат считается отрицательным или сомнительным.

Оценка реакции проводится специальным аппаратом на основе метода спектрофотометрии.

Поэтому человеческая субъективность при восприятии цвета на результаты теста не влияет.

Полимеразно-цепная реакция

Молекулярно-генетические методики вывели диагностику ВИЧ на качественно новый уровень.

С помощью ПЦР можно обнаружить инфекцию на тех этапах, при которых описанные выше серологические методы не информативны.

Т.е в самом начале процесса, когда антител еще нет.

И в продвинутой фазе, когда иммунная система поражена настолько, что антител уже нет.

Суть заключается в следующем:

  • Из периферической крови выделяют лимфоциты - типичные клетки-мишени для ВИЧ.
  • Экстрагируют нуклеиновые кислоты из клетки.
  • Обрабатывают пробу специальными реагентами-праймерами, которые «настроены» на выявление уникального участка провирусной ДНК, отвечающего за синтез стержневого белка ВИЧ.

 

Если такая реакция состоялась, то праймер начинает синтезировать этот фрагмент, многократно дублируя его.

ПЦР исследования на ВИЧ

За счет этого достигается очень высокая чувствительность метода.

При правильном и качественном проведении ПЦР, можно обнаружить 1 провирусную ДНК на 100 тыс. лимфоцитов.

Разработана модификация ПЦР, с помощью которой можно выявить истинную РНК вируса.

Это позволяет оценивать вирусную нагрузку (количество вирионов в крови), эффективность антиретровирусной терапии и находить резистентные к препаратам АРТ формы вируса.

Также только ПЦР подходит для дифференциальной диагностики между разными видами ВИЧ.

Быстрые тесты

Ни один из вышеперечисленных методов не подходит для массовой скрининговой диагностики.

В первую очередь - из-за высокой стоимости и необходимости в специальном дорогостоящем оборудовании.

Поэтому такую популярность получили тесты для экспресс-диагностики и, надо заметить - вполне заслуженную популярность.

Для их проведения не нужна высокотехнологичная техника и асептические условия: все помещается в один пакетик.

В нем есть тест-полоска с иммобилизованными антигенами, одноразовый скарификатор и буферный раствор с проявляющими антителами.

То есть перед нами очередной вариант хорошо изученной ИФА.

Прокалывается палец (нужна капиллярная кровь) и капля крови помещается в специальную лунку на полоске.

быстрый тест на ВИЧ

Затем туда же капают буферный раствор.

При положительном результате в окошке пластинки появляется поперечная полоска напротив специальной метки.

За счет чего методика называет хроматографической.

Чувствительность и специфичность метода сравнимы с иммуноферментным анализом.

Однако для верификации диагноза положительные пробы должны подтверждаться в специализированной микробиологической лаборатории иммуноблоттиногом или классическим аппаратным ИФА.

Без быстрых тестов не обойтись в ряде случаев:

  • При обследовании больших количеств людей
  • В случае необходимости в экстренном переливании крови
  • Срочная трансплантация органов
  • Тестирование беременных, уклонявшихся от женской консультации до родов

 

То есть тогда, когда необходимо получить действительно быстрый ответ.

Но для того, чтоб сделать заключение о наличии или отсутствии инфекции, нужно провести дифдиагностику вирусных инфекций.

Обязательно проводятся аппаратные лабораторные тесты.

Сроки

Слабым местом всех точных способов диагностики является долгое (сравнительно) ожидание результата.

Причина - высокая стоимость диагностического оборудования и расходных материалов.

Из-за чего требуется полная загрузка аппарата.

Так, если в лаборатории применяются планшеты на 96 лунок, то в работу образцы плазмы пойдут только тогда, когда медики насобирают 96 проб.

Из-за этого ответ центра можно получить спустя 5-10 или 14 дней от момента сбора и доставки образца крови.

А всего полноценное обследование с точным выводом об отсутствии инфекции потребует несколько месяцев.

сроки получения результатов

Причина в том, что на ранних этапах развития инфекции (в пределах 2-3 месяцев после момента заражения), антител к ВИЧ слишком мало.

Этот период называется серологическим окном.

Поэтому если произошла рискованная по заражению ситуация - секс с ВИЧ-инфицированным или авария при оказании медицинской помощи или любая другая беда - анализ сдают сразу.

Если он отрицателен, то человеку назначают повторное обследование через какое-то время.

Средний период составляет 4-6 месяцев, хотя могут быть изменения в обе стороны.

Такие методические подходы диагностики и исключения ВИЧ применяются и в настоящее время.

Предложены они были еще в далеком 1997г Всемирной организацией здравоохранения и объединенной программой ООН по борьбе с ВИЧ/СПИД.