Венерология

ПЦР на ЗППП

Группу инфекционных заболеваний, преимущественным путем передачи которых является половой, называют половыми (ранее применялся термин «венерические») инфекциями.

Распространенные аббревиатуры названия – И (инфекции) ППП, З (заболевания) ППП.

Венерические инфекции вызываются вирусными, бактериальными агентами и иными микроорганизмами.

ПЦР диагностика на ЗППП

Преимущественной передачей при сексуальном контакте характеризуются инфекции бактериальной природы:

  • гонорея (возбудитель – гонококки, Neisseria gonorrhoeae)
  • донованоз, иначе гранулема паховая (Klebsiella (Calymmatobacterium) granulomatis)
  • хламидиоз и венерическая лимфогранулема (хламидии, Chlamydia trachomatis)
  • сифилис (бледная трепонема, Tr. pallidum)
  • микоплазмоз (Myc. genitalium)
  • мягкий шанкр (Haemophilus ducreyi)
  • уреаплазмоз (Ur. urealyticum)

Инфекции вирусной природы:

  • ВИЧ
  • вызванная Т-лимфотропным вирусом
  • герпетическая (ВПГ, вирус простого герпеса)
  • папилломавирусная (ВПЧ, вирус папилломы человека)
  • гепатит В
  • контагиозный моллюск (Molluscum contagiosum virus)

Другие инфекции:

  • трихомониаз (Trichomonas vaginalis)
  • лобковый педикулез, иначе фтириаз (вызывается лобковой вошью) и другие

Помимо перечисленного существуют заболевания, для которых половой путь передачи возможен, но не является единственным: кандидоз, цитомегаловирусная инфекция и пр.

Ежегодно свыше 340 млн людей заболевает такими инфекциями.

При отсутствии адекватного лечения данные заболевания создают серьезную угрозу здоровью, а некоторые и жизни человека.

Так, почти 40% женщин с хламидиозом или гонореей без лечения страдают воспалительными патологиями органов малого таза (сальпингитом, оофоритом, воспалением матки, параметритом, тазовым перитонитом и пр.).

Почти четверть из этих женщин сталкивается с проблемой бесплодия.

бесплодие – последствие ЗППП

При сифилисе четверть беременностей завершается гибелью плода, а еще 14% – смертью новорожденного.

Гонорея и хламидиоз у будущей матери – причина слепоты почти у 4000 новорожденных ежегодно.

Папилломавирусная инфекция провоцирует полмиллиона эпизодов рака шейки матки каждый год, при этом 240 тысяч случаев смертельны.

Порядка 350 миллионов случаев хронического гепатита и примерно миллион смертей от рака печени и цирроза связаны с вирусом гепатита В.

Лечение половых инфекций, зачастую весьма схожих по проявлениям, подбирается в зависимости от возбудителя заболевания, а также его индивидуальной чувствительности к стандартным препаратам.

Например, бактериальные ЗППП эффективно лечатся антибиотиками, разными для разных бактерий.

К сожалению, терапия вирусных заболеваний весьма ограничена.

В отношении отдельных вирусов эффективны нуклеозиды, например, ацикловир, интерфероны.

Положительным моментом является существование препаратов, подавляющих активность вирусов, например, при ВИЧ.

Также то, что некоторые вирусные болезни склонны к самоизлечению (например, папилломавирусная инфекция).

В связи с подобным разнообразием терапий и сходством симптомов весьма важным оказывается лабораторное установление причины заболевания.

Современным и высокоточным диагностическим методом анализа на ЗППП является ПЦР или PCR (аббревиатуры от «полимеразная цепная реакция», «polymerase chain reaction»).

 

 

Какие врачи занимаются ПЦР на ЗППП?

Назначить исследование может как врач общего терапевтического профиля, так и узкий специалист – венеролог-дерматолог, инфекционист, гинеколог, уролог и др.

венеролог Ленкин Сергей Геннадьевич

Также врач подскажет, где, в какой лаборатории лучше сдать ПЦР на ЗППП.

 

Что собой представляет ПЦР диагностика на ЗППП?

Анализ на ЗППП методом ПЦР (цена зависит от количества выявляемых возбудителей) подразумевает многократное копирование определенного участка ДНК микроорганизма, находящегося в образце.

В результате количество анализируемого вещества достигает значений, достаточных для обнаружения и идентификации.

Каждый организм имеет ДНК уникального строения.

Практически у всех возбудителей половых инфекций строение нуклеиновых кислот детально изучено (у вируса иммунодефицита генетическая информация закодирована в РНК).

При проведении исследования, например, образца крови, методом ПЦР на ЗППП – вич, гепатиты, герпес 1 и 2 типа и пр. – фрагмент ДНК получают в большой концентрации и сравнивают с эталонным образцом.

Такой анализ называется качественным, поскольку дает ответ на вопрос о наличии конкретного микроорганизма, но не о его начальном содержании в образце.

ПЦР на ЗППП качественный

Для большинства инфекций присутствие в биологических образцах возбудителя ИППП можно обнаружить уже через 2 недели от момента заражения.

А, например, для ВИЧ идентификация РНК вируса в крови возможна на 10-е сутки.

Существует множество вариантов проведения исследования, а именно, ПЦР:

  • с обратной транскрипцией (так, в случае с ВИЧ сначала по РНК воспроизводят ДНК вируса, а затем кусочек последнего копируют)
  • с «горячим» стартом, когда синтез запускается в заданный момент времени
  • в режиме «реального времени» – количественный ПЦР на ЗППП, с использованием флуорецентных красителей, встраивающихся в молекулу ДНК, с анализом постепенного усиления флуоресценции по мере увеличения количества копированных молекул (можно рассчитать первоначальное количество анализируемой молекулы)
  • мультиплексная, с одновременным определением нескольких микроорганизмов, и другие

Каждая из методик проведения ПЦР на ЗППП, цена которых соответственным образом различается, применяется по определенным показаниям.

Так, количественный анализ ПЦР крови используется для определения вирусной нагрузки, контроля эффективности терапии (при гепатитах С и В).

 

 

Когда берут ПЦР на ЗППП?

Вопрос о том, когда сдавать (после заражения, при наличии или отсутствии симптомов и пр.) анализы на половые инфекции, оказывается весьма насущным для многих людей.

Анализ на ЗППП методом ПЦР рекомендуется делать в таких ситуациях, как:

  • появление настораживающих симптомов (выделений, болей, высыпаний, покраснений, дискомфортных ощущений, увеличения лимфоузлов и пр.)
  • случайная сексуальная связь без использования презерватива
  • планирование беременности
  • плановая госпитализация
  • профосмотр
  • ИППП у полового партнера и т.п.

партнер заразил ЗППП

Контрольный анализ ПЦР на ЗППП после лечения при отсутствии проявлений заболевания проводится через 2 недели.

ПЦР обладает высокой чувствительностью и неспособен дифференцировать жизнеспособные и нежизнеспособные микроорганизмы.

Поэтому желательно осуществлять исследование через месяц после приема последней дозы препарата.

Соответственно, и ответ на вопрос, когда можно после антибиотиков делать ПЦР, аналогичен предыдущим рекомендациям.

Данным методом возможно обнаружение как отдельных возбудителей, так и проведение комплексного анализа на несколько микроорганизмов.

Лечащий врач индивидуально определяет пациенту необходимый объем исследований.

В лабораториях распространены комплексные варианты:

  • ПЦР на 6 ЗППП
  • ПЦР на 8 инфекций
  • ПЦР на 12 ЗППП
  • ПЦР на 15 заболеваний

Например, расширенный анализ на ЗППП методом ПЦР «15 инфекций» включает выявление возбудителей из следующего списка:

  • герпес-вирусов 1 и 2 типов
  • вирусов папилломы человека (низкоонкогенных 6,11 типов, высокоонкогенных 6, 18 типов)
  • цитомегаловируса (в образцах любых тканей)
  • хламидий (особенно у беременных)
  • уреаплазм (Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum)
  • микоплазм (Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis)
  • гонококков
  • трихомонад (применяется в РФ и Европе, не применяется в Америке)
  • вируса Эпштейна-Барр
  • трепонемы (применяется в РФ)
  • кандид (особенно нетипичных форм)
  • гарднерелл (эти бактерии не относятся к ИППП, но служат маркером бактериального вагиноза, способствующего заражению половыми инфекциями)

патогены возбудители ЗППП

 

Каковы преимущества и недостатки метода ПЦР?

Высокая точность и эффективность ПЦР для выявления ЗППП обусловлены тем, что метод основан на непосредственном обнаружении самого возбудителя.

Даже если последний представлен единичными клетками (оптимальным, однако является содержание 10 – 100 клеток).

Особенно важное значение этот факт имееет в отношении инфекций бессимптомного течения.

Исследоваться могут практически любые ткани (эпителиальные клетки, слюна, моча, кровь, слизистые выделения, сперма и др.), то  есть метод характеризуется выраженной универсальностью.

Высокая специфичность анализа определяется выявлением фрагмента ДНК, специфической для данного конкретного микроорганизма.

В качестве примера можно рассмотреть халмидийную инфекцию.

При диагностике которой чувствительность ПЦР составляет 90%, а специфичность достигает 100%, что заметно выше аналогичных критериев для иных методов.

Кроме того, все исследование занимает порядка 5 часов, позволяя оперативно получать результат в острых случаях.

проведение ПЦР диагностики

При всех своих уникальных достоинствах метод не лишен и некоторых недостатков:

  • более высокая стоимость, чем у многих иных диагностических вариантов
  • невозможность дифференциации жизнеспособных и нежизнеспособных форм возбудителя
  • необходимость высочайшего квалификационного уровня персонала и жесткого соблюдения правил проведения исследования
  • возможность ложноположительных и ложноотрицательных результатов
  • отсутствие гарантии, что именно выявленный микроб – причина имеющихся проблем
  • риск гипердиагностики (чрезмерная чувствительность обуславливает обнаружение минимальных количеств вируса, далеко не всегда клинически значимых)

 

Как сдавать ПЦР на ЗППП?

О том, как сдавать ПЦР анализ на ЗППП, подробно расскажет врач, назначающий исследование.

На ЗППП берется мазок для анализа ПЦР из уретры, маточного канала, со стенок влагалища, прямой кишки.

мазок ПЦР на ЗППП

При необходимости ПЦР мазок на ЗППП забирается со слизистой рта, конъюнктивы.

При наличии соответствующих проявлений взятие образца осуществляется с поверхности высыпаний (например, на сифилис, герпес, кандиды).

При беременности наиболее точным анализом оказывается ПЦР мазка из влагалища на такое ЗППП, как хламидиоз.

Исследование проводится при постановке на учет и повторно в 3-м семестре.

Также ПЦР у беременных женщин на ЗППП проводится на:

  • гонорею (для лиц из групп риска и/или проживающих в местности с высоким уровнем заболеваемости)
  • герпесную инфекцию (только если присутствуют характерные высыпания)
  • папилломавирусную инфекцию (для определения группы онкогенности после выявления соответствующих изменений по результатам ПАП-теста)
  • цитомегаловирусную инфекцию

ПЦР на ЗППП для мужчин и женщин оказывается наиболее точным методом в диагностике уреаплазмоза.

ПЦР крови применяется для выявления цитомегаловируса у младенцев и беременных, вирусов гепатитов С и В, вируса Эпштейна-Барр, ВИЧ.

ПЦР слюны на ЗППП позволяет выявлять цитомегаловирус, вирус Эпштейна-Барр.

ПЦР секрета простаты на ЗППП проводится при воспалении предстательной железы.

Простатический секрет получают путем массажа железы и анализируют на предмет инфекционных возбудителей.

Также о воспалительных изменениях в простате, яичках, семенных пузырьках можно судить и по данным ПЦР спермы на ЗППП в сочетании со спермограммой.

У мужчин довольно информативен метод ПЦР мочи на ЗППП (исследуется трехстаканная проба, образец, полученный по методу Нечипоренко, и пр.):

  • гонорею
  • трихомониаз
  • микоплазмоз
  • хламидиоз и др.

У женщин такое исследование ограничивается из-за возможности ложноотрицательных результатов.

В ряде ситуаций необходимо проведение комплексного обследования несколькими методами.

Например, при сочетанном проявлении гонореи и хламидиоза диагноз устанавливается по совокупным данным микроскопии и ПЦР.

Мазок для ПЦР из члена на ЗППП берется специальным зондом у мужчин с расстояния примерно 1 - 3 см от наружного отверстия уретры, иногда после предварительного массажа простаты.

забор анализа на ПЦР ЗППП из уретры

После манипуляций из-за легкого травмирования слизистой возможны временные проявления уретрита (болезненность при мочеиспускании, покраснение и т.п.).

У женщин, как правило, забор осуществляется зондом из уретры, цервикального канала, вагинальным тампоном с влагалищного заднего свода, прямой кишки.

При наличии высыпаний, язв, эрозий мазок для исследования берется с их поверхности.

У женщин взятие из половых органов материала для анализа проводится до наступления менструации или через несколько суток после ее завершения.

Зонд в уретру вводится на глубину около сантиметра, в цервикальный канал – 0,5-1 см.

При наличии эрозий берется материал с границы между пораженной и здоровой тканями.

У детей образец берется только с наружного уретрального отверстия.

 

Какая требуется подготовка к ПЦР на ЗППП?

Если для анализа материал будет браться из уретры, важно не менее 1,5 – 2-х часов воздерживаться от мочеиспускания.

За сутки до исследования необходимо исключить половой контакт, за неделю – прием лекарственных препаратов и лечебных манипуляций (согласовывается с лечащим врачом).

В день посещения лаборатории женщины не должны проводить туалет половых органов, спринцевания.

При наличии выделений зонд вводят в уретру после обработки стерильным физраствором.

Если выделений нет, то предварительно проводят массаж уретры.

У женщин массаж уретры о лобковое сочленение проводят до введения зонда.

Анализ крови методом ПЦР не требует специальной подготовки, но, чаще всего, проводится в утренние часы после ночного голодания.

 

Как расшифровываются результаты анализа ПЦР на ЗППП?

Сроки изготовления ПЦР анализа крови и мазков обычно составляют 1 рабочий день.

Хотя на само исследование затрачивается 4 -5 часов, что позволяет при необходимости получить результат более быстро.

В случае качественного анализа интерпретация данных не вызывает затруднений: при обнаружении ДНК – результат положительный, при отсутствии – отрицательный.

Количественный анализ бывает необходим для определения эффективности терапии, контроля прогрессирования заболевания, оценки вирусной нагрузки.

Обычно подобное исследование рекомендуется в отношении вирусов гепатита В и С (определяются ДНК и РНК соответственно).

количественная ПЦР диагностика

При этом в ситуации, когда содержание нуклеиновых кислот не достигает порогового значения чувствительности метода, а это порядка 15-20 МЕ/мл, или вообще равно нулю, то на бланке пишется «не обнаружено».

В иных случаях возможны такие показания:

  • превышение верхнего предела измерений – от 108 МЕ/мл
  • содержание микроорганизма менее 102МЕ/мл
  • содержание микроорганизма от 102 до 108 МЕ/мл

Исходя из полученных данных, врач определяет дальнейшую терапевтическую тактику.

Например, если количество вируса гепатита В превышает 2000МЕ/мл, назначается лечение.

До начала процедуры проведения полимеразной цепной реакции проводится диагностический тест на предмет «контроля взятия материала».

В бланке исследования этот параметр фигурирует как КВМ.

Данный тест позволяет установить, достаточно ли для анализа содержащихся в образце молекул.

Минимальное значение КВМ составляет 4 единицы, если же этот показатель меньше, то необходимо повторить взятие биообразца.

Технические сложности проведения, недостаточное качество аппаратуры и/или используемых химических компонентов (праймеров) объясняет появление ложноотрицательных и ложноположительных результатов ПЦР на ЗППП.

Кроме того, ложноположительная ПЦР на ЗППП может появляться из-за внешнего загрязнения образца в лаборатории или при перевозке.

Ложноотрицательная ПЦР на ЗППП обычно связана с нарушением техники забора материала.

Например, у женщин при хламидиозе с очаговым поражением важно брать образцы не только из уретры и/или влагалищной части маточной шейки, но и из более глубоких участков цервикального канала.

В то же время противоречивые данные последовательно проведенных анализов методом ПЦР на ЗППП не всегда связаны с некачественным исследованием.

Для возбудителей некоторых инфекций (уреаплазмоза, микоплазмоза, гарднереллеза и др.) возможен такой вариант, как временное носительство.

Это когда микробы уничтожаются организмом со временем, а спустя некоторое время происходит реинфицирование от партнера.

Из-за перечисленных выше особенностей проведения анализов на ЗППП разработаны четкие протоколы исследования на каждую инфекцию в отдельности и общей диагностики половых инфекций.

Например, для хламидиоза рекомендована комбинация ПЦР с бактериальным посевом.

В целом, использование такого метода диагностики половых инфекций, как ПЦР, позволяет обнаруживать заболевание на самых ранних стадиях даже в отсутствие симптоматических проявлений.

А результатом этой диагностики оказывается значительно большая эффективность терапии.

Для диагностики ЗППП методом ПЦР обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.