Венерология

Обследование на сифилис

Сифилис – системное заболевание инфекционного генеза, возбудителем которого является бледная трепонема (Treponema pallidum).

Несмотря на совершенствование диагностических методик и разработку новых схем лечения, в здравоохранении это заболевание остается общемировой проблемой.

серологическое обследование на сифилис

В последние десятилетия наблюдается тенденция к снижению заболеваемости сифилисом, но эпидемиологическая ситуация становится даже более напряженной.

Это связано с несколькими факторами.

  • В структуре заболевания превалируют стертые асимптомные варианты.
  • Увеличивается количество поздних форм заболевания.

Всё это диктует необходимость применения специалистами самых сверхчувствительных современных методик обследования на сифилис.

 

Методы обследования на сифилис

Их делят на группы:

  1. Прямые – с их помощью есть возможность выделить самого возбудителя либо его гены непосредственно в пораженном очаге.
  2. Непрямые – это методы серологического обследования на сифилис, позволяющие в крови пациента обнаружить антитела (белки) к возбудителю.

Необходимо понимать, что среди анализов обследования на сифилис лишь прямые методы диагностики являются абсолютным критерием для выставления диагноза.

Рассмотрим самые точные анализы, позволяющие дать однозначный ответ о наличии или отсутствии бледной трепонемы в организме пациента:

  • ПИФ.
  • Методику темнопольной микроскопии.
  • Молекулярно-биологическое исследование методом ПЦР.

 

Темнопольная микроскопия на сифилис

Исследование проводится с использованием микроскопа с двояковыпуклой линзой, собирающей (конденсирующей) лучи света.

Она обеспечивает максимальное освещение объекта исследования.

Трепонема паллидум при простой микроскопии без окрашивания не видна.

Но с помощью конденсера, в котором сконцентрированный свет поступает на стекло через узенькую щель, получается отраженное боковое подствечивание всех твердых частиц (эффект Тиндаля).

темнопольная микроскопия на сифилис

Для микроскопии используют биологический материал в виде серозного отделяемого.

Его получают с язвенных и эрозивных поверхностей кожи, бляшек и папул, а также мокнущих поверхностей, образующихся после расчесов пациентом.

При отсутствии материала с кожи и слизистых может быть взята пункция из пораженных лимфоузлов.

При рассмотрении возбудителя в затемненном поле микроскопа можно довольно точно его охарактеризовать.

Трепонема паллидум выглядит как нежная подвижная спиралька с едва различимым серебристым блеском. 

Поскольку Treponema pallidum изучается живой, ее легко различить по особому характеру движения.

Она вращается вокруг собственной оси, всегда движется однонаправленно, качается подобно маятнику или «шагает», сгибаясь и разгибаясь.

Точность этого анализа для обследования не вызывает сомнений даже при отсутствии данных об антителах крови.

Является ли метод ТПМ универсальным и единственно точным и бывают ли ложно положительные анализы для сифилиса при применении этого обследования?

К сожалению, существуют непатогенные трепонемы, которые по типу движения и своей морфологической форме абсолютно схожи с T. Pallidum.

Наиболее часто за возбудителя сифилиса можно принять следующих микроорганизмов: Treponema pallidum, carateum pertenue и др.

Преимуществами dark field microscopy является низкая стоимость и оперативность исполнения, простота выполнения анализа и хорошая чувствительность.

Но анализ не пригоден для контроля пролеченности и в том случае, когда подвижность трепонем снижена из-за приема пациентом антибиотиков.

 

Прямая иммунофлюоресценция (ПИФ) на сифилис

Это обследование, дополняющее темнопольную микроскопию.

Основано на взаимодействии помеченных флюорохромом белков-антител и антигенов возбудителя, которые расположены в тканях микроорганизма.

Для исследования берется закрепленный в парафине мазок или биоптат.

На него накладывают антитела, меченные флуоресцентным красителем (ФИТЦ).

Образуется комплекс антиген+антитело, который и переносят под микроскоп для изучения.

Трепонему узнают по характерному свечению, имеющему зеленый тон.

трепонема в темном поле

К преимуществу ПИФ можно отнести большую точность в плане отличия бледной трепонемы от непатогенных форм.

Несомненным плюсом является и то, что для исследования не обязательно брать свежий материал, изучению можно подвергать уже имеющиеся образцы, полученные при биопсии или аутопсии.

Есть и отрицательные стороны этого лабораторного метода:

  • во многих странах нет сертификатов либо не налажено промышленное изготовление необходимых составляющих анализа. В частности, ФИТЦ-меченых антител, вступающих в реакцию с Treponema pallidum;
  • исследование нельзя выполнить «не отходя от больного», т.к. требуется специальное оборудование. Поэтому сроки изготовления анализа затягиваются.

 

Полимеразная цепная реакция на сифилис

Биоматериалом для исследования могут служить:

  • отделяемое сифилидов;
  • соскобы шанкров, широких кондилом и других элементов сыпи;
  • спинномозговой пунктат, сыворотка крови и другие биологические жидкости;

Изучаемый материал может быть свежим, замороженным, а также фиксированным в парафине.

Кратко проведение ПЦР можно описать следующей схемой: в собранном материале находят ДНК нужного микроорганизма и многократно ее размножают.

Это позволяет найти генетический материал даже в том случае, если в пробу попало всего несколько трепонем.

Для диагностики сифилиса разработано несколько модификаций рассматриваемого метода.

  1. PCR-RT – исследование в режиме реального времени, при котором учет результата происходит по интенсивности свечения меченых частиц.
  2. PCR-ОТ – исследование с использованием фермента обратной транскриптазы.
  3. PCR-М (мультиплексная) – помогает обнаружить возбудителей сразу нескольких болезней, если они присутствуют в биоматериале.

ПЦР на сифилис в реальном времени

Несомненно, ПЦР-диагностика обладает целым рядом достоинств:

  • высокая специфичность (100%) и чувствительность (97%);
  • универсальность – возможность обнаружения нуклеиновых кислот любых микроорганизмов;
  • для получения достоверного результата достаточно всего несколько микролитров образца;
  • быстрое получение расшифровки анализа;

Учитывая высокие требование к оснащению лаборатории, качеству тестовых систем и регламенту исследования, а также связанную с этим высокую стоимость анализа, скрининговое обследование на сифилис этим способом не проводится.

Он рекомендован:

  • при изучении отделяемого с эрозивных элементов сыпи в случае подозрения на первичные формы сифилитической инфекции;
  • при локализации подозрительных в отношении сифилиса элементов на слизистой оболочке ротовой полости;
  • если перед обращением к венерологу пациент принимал антибиотики;
  • для выявления Tr.pallidum при отрицательной серологии;
  • в случае клинического предположения нейросифилиса.

NASBA – одно из новейших направлений молекулярной генетики.

В широкую практику этот метод, основанный на выделении рибонуклеиновой кислоты возбудителя, пока не внедрен.

Но имеющиеся наработки говорят о перспективности диагностики сифилиса с помощью этого направления в ближайшем будущем.

 

Непрямая диагностика сифилиса

Непрямые методы (серодиагностика) основаны на выявлении особых веществ (называемых антителами) в сыворотке крови и жидкости, полученной с помощью пункции спинного мозга.

Антитела представляют собой специфические белки, появляющиеся в крови в ответ на внедрение в организм бледной трепонемы.

обязательное обследование на сифилис

Существует два типа антител:

  •  IgM-антитела (свежие) – образуются через 2 недели после заражения и быстро исчезают при адекватном лечении.
  • IgG-антитела – появляются позже, в процессе лечения их количество уменьшается медленно, в небольшом титре могут сохраняться всю жизнь.

Обследование с использованием серологических тестов применяется для:

  1. Спорных ситуаций, когда несколько методов показывают разные результаты.
  2. Установления скрытого сифилиса.
  3. В процессе лечения контролируют титры анализов, чтобы удостовериться в правильности выбранной схемы терапии.
  4. Профилактики заболевания (проведение скрининга на выявление инфекции).

Поскольку на сегодняшний день известно более десяти видов анализов, не существует единой их классификации.

Условно все методы можно разделить на 2 группы в зависимости от типа используемого антигена.

Это трепонемные и нетрепонемные тесты.

При обследовании обычно сочетают эти две реакции.

Поскольку по результатам только трепонемных тестов нельзя различить формы нелеченного и уже пролеченного сифилиса.

К самым известным нетрепонемным тестам относят:

  • Реакцию Вассермана (RW).
  • Микрореакцию преципитации с плазмой или неактивированной сывороткой (МРП).
  • Реагиновая отборочная проба и др.

Нетрепонемные тексты реагируют на повреждение в ткани, поэтому в отношении сифилиса не всегда специфичны.

Но именно эти анализы используют в качестве скринингового метода ввиду дешевизны и простоты выполнения.

Эта группа исследований позволяет провести выборку пациентов, нуждающихся в более углубленной диагностике сифилиса.

Для трепонемных тестов характерно использование специфических антигенов.

Поэтому их выполнение является обязательным обследованием на сифилис для постановки окончательного диагноза.

К наиболее известным трепонемным тестам относят РИФ, ИФА, РИТ, РПГА.

 

Каковы сроки обследования на сифилис после заражения

Как известно, от момента попадания трепонемы в организм до появления твердого шанкра проходит не менее 2-3 недель.

Примерно в это же время в крови начинают определяться иммуноглобулины типа М.

иммуноглобулины при сифилисе

В этот период уже можно проводить серологические тесты.

Если взять анализы раньше, высока вероятность получения ложноотрицательного результата.

Время, когда после заражения можно проводить обследования, составляет две-три недели.

Тем не менее, при получении отрицательного результата и имеющихся симптомах заболевания рекомендовано повторить анализ через 10 суток.

 

Обследование на сифилис после лечения

Обследование после лечение носит название клинико-серологического контроля (КСК), оно включает комплекс мер, направленных на установление факта излеченности.

КСК проводят с использованием нетрепонемных тестов (РМП) и серологических реакций – иммуноферментного анализа, реакции пассивной гемагглютинации или реакции иммунной флюоресценции.

Пациенты, которые были в тесном бытовом или сексуальном контакте с больным ранним сифилисом, в обязательном порядке проходят курс превентивного лечения.

После окончания терапии спустя 3 месяца необходим однократный серологический контроль.

Больные с первичной серонегативной формой сифилиса также находятся под наблюдением в течение 90 дней.

Пациенты с ранней формой сифилиса, у которых до лечения нетрепонемные тесты были положительными, стоят на учете до получения отрицательных результатов, а затем еще на протяжении полугода.

Каждые 3 месяца проводится повторное исследование для подтверждения отрицательного результата.

 

Обследование беременных на сифилис

В протоколах исследования беременных исследование на сифилис является обязательным.

Не важно, сохраняется ли беременность, либо пациентка идет на прерывание, в самые ранние сроки проводится первое скрининговое обследование посредством серологического нетрепонемного и трепонемного тестов.

скрининговое обследование на сифилис

Второе обследование при беременности проводят в сроках 28-32 недели.

А в группах повышенного риска после 36 недель гестации проводится третье обязательное исследование.

При получении положительного результата проводится дообследование одним из прямых методов диагностики.

Заражение бледной трепонемой после 25 недель беременности приводит к множеству осложнений.

Резко увеличивается или снижается индекс амниотической жидкости, что приводит к кислородной недостаточности плода, задержке его роста.

Если плод не погибает внутриутробно, высок риск поражения нервной системы (сопровождающейся умственной отсталостью) у рожденного ребенка.

 

Диагностика сифилиса у детей

Выявление врожденного сифилиса – одна из важнейших задач современного здравоохранения.

При внутриутробном заражении одним из методов идентификации Tr. pallidum является темнопольная микроскопия.

Для изготовления препарата могут быть взяты ткани пуповины, амниотическая (околоплодная) жидкость, жидкостная составляющая плаценты, отделяемое из носа новорожденного.

При наличии на ладонях и подошвах ребенка пузырей берут их содержимое.

С диагностической целью применяют и серологические тесты.

Необходимо знать, что в первые 10 дней жизни младенца серологические реакции могут давать отрицательный результат.

Это связано с лабильностью белков и неустойчивой коллоидной сывороткой.

Отрицательные реакции в первые 1-3 месяца также могут быть в том случае, если заражение произошло на последних сроках гестации.

Недостоверные результаты диагностики сифилиса могут быть следствием двух факторов.

  • Ошибки связаны с недостаточным уровнем ответственности медперсонала при заборе, транспортировке, хранении биологических образцов. Несоблюдение условий и срока хранения тест-наборов также нарушает чувствительность метода, что служит причиной ошибок.
  • Особенности организма пациента.

Острые ложноположительные результаты (фиксируются менее 6 месяцев) могут встречаться:

  • у беременных,
  • во время менструального кровотечения,
  • после вакцинаций,
  • после недавно перенесенного острого инфаркта, 
  • при многих инфекционных заболеваниях (вирусный гепатит, корь, ветрянка, инфекционным мононуклеоз, паротит, пневмококковая пневмония, скарлатина, туберкулез, лайм-бореллиоз и др.).

Хронические ложноположительные результаты (фиксируются более полугода, а иногда и всю жизнь) – часто наблюдаются при аутоиммунной патологии.

анализы для обследования на сифилис

Среди таких заболеваний называют системную красную волчанку, злокачественные новообразования, заболевания крови, применение инъекционных наркотиков, аллергические состояния.

Число ложноположительных реакций увеличивается с возрастом, особенно у женщин.

Среди лиц старше 80 лет положительные тесты наблюдаются у каждого десятого пациента.

Самой частой причиной ложных положительных результатов является антифосфолипидный синдром.

Это аутоиммунный процесс, при котором в организме существуют антитела, вступающие в перекрестную реакцию с антигенами тест-систем на сифилис.

Причиной ложноположительных результатов может быть частые переливания крови, капельницы, внутривенные инъекции любых препаратов.

Положительные ложные результаты регистрируются и при заражении человека очень редкими бактериями, имеющими общие гены с бледной трепонемой.

Это возбудители клещевого бореллиоза, возвратного тифа, тропических трепонематозов.

Ложноотрицательные результаты на сифилис могут регистрироваться при тестировании лиц с иммунодефицитом, поскольку у них снижена общая реактивность организма.

Ложноотрицательными результаты могут быть и тогда, когда обследование попало на серонегативное окно – первые несколько недель от момента попадания трепонемы в организм человека.

 

Куда обратиться для обследования на сифилис

сифилидолог Ленкин  Сергей Геннадьевич

Поскольку сифилис – одно из основных венерических заболеваний, его изучение полностью лежит на кожно-венерологических диспансерах.

У венерологов этих учреждений есть большой опыт в распознавании заболевания по клинической симптоматике, а также самые современные методы лабораторного выявления бледной трепонемы.

Если вам необходима консультация, приглашаем в наш платный медцентр дерматологии и венерологии.

Опытные врачи нашего центра занимаются вопросами диагностики сифилиса уже более 10 лет.

Для обследования на сифилис обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.